凯氏定氮法测定蛋白质含量，考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度

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考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度，是利用蛋白质中的碱性氨基酸(特别是精氨酸）和芳香族氨基酸残基与考马斯亮蓝G-250染料在碱性条件下可以结合的原理，使染料的最大吸收峰位置由465nm变为595nm，溶液颜色也由棕黑色变为蓝色，这样通过分光光度法可以定量测定微量蛋白的浓度。这种蛋白质测定法快速、灵敏，是目前灵敏度最高的蛋白质测定方法。

(1）白菜匀浆液的制备:称取5g白菜叶，用水洗净，吸干表面水分，剪碎，加入0.05mol/LTris-HCl,pH7.4磷酸盐缓冲液PBS，0℃~4℃下冰浴研磨15～20min，12000r/min冷冻离心10min，上清即为白菜叶的溶性蛋白溶液。

(2）制备标准曲线:按照下表所示条件进行混合摇匀后，在25℃下保温10min，静置5min，以第一管为空白，在波长595nm下测定其吸光度值，以标准蛋白的浓度对应吸光度值做线性回归方程。

(3）样品中蛋白质的测定:样品适当稀释后，另取一干净试管，加入稀释样品1.0mL及考马斯亮蓝试剂5.0mL，混匀，在25℃下保温10min后，静置5min，于波长595nm下测定其吸光度值，代入标准曲线中，计算出蛋白质的含量。

（1）合理稀释待测蛋白溶液，使测定值在标准曲线的线性范围内。

（2）控制好平行之间的标准误差。分光光度计检测吸光度时，至少设置两个平行孔，取平均值。

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