白细胞介素2(白细胞介素2的测定)

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白细胞介素2（IL－2）主要由活化的T淋巴细胞产生，又为T淋巴细胞增殖所必需，故IL－2产生的水平可以反映T淋巴细胞的状态。IL－2不仅是免疫调节重要的研究对象，而且与临床多种疾病密切相关。CTLL是C57BL／6来源小鼠的杀伤性T淋巴细胞系，由Gills在1977年建立，这种细胞只有在IL－2存在的培养基中才能生长，因此可作为指示细胞来测定待检样品中IL－2的水平。除CTLL外，丝裂原活化的T淋巴母细胞亦可作为检测IL－2活性的指示细胞。常用的方法有3H－TdR掺入法和MTT法，可根据所测的cpm值或od值反映活细胞的数量和活性，从而推知待检样品中IL－2的水平。

细胞增殖的基本条件或前提为细胞质和细胞核的复制，这是正常细胞增殖过程缺一不可的前提。通常一个细胞周期可大致分为四期，即G1期、S期、G2期和M期。其中S期为DNA合成期，主要功能活动为DNA合成。3H－TdR，即（甲基－3H）胸腺嘧啶核苷（［3H－methyl］thymidine），是DNA合成的前体，加入细胞培养液中后被细胞摄取作为DNA合成的原料。细胞合成的DNA越多，所掺入的3H－TdR就越多。因此，检测所掺入的3H－TdR就可反映细胞增殖的程度。因该方法有同位素污染问题，故实用性较差。

2.MTT法，即四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法。

MTT是一种噻唑盐，化学名为3－（4，5－二甲基－2－噻唑）－2，5－二苯基溴化四唑，水溶液为黄橙色。小鼠脾细胞受到COnA作用后发生增殖活化，其胞内线粒体琥珀酸脱氢酶活性相应升高，MTT作为其底物参与反应，形成蓝色的甲臜（formazan）颗粒沉积于细胞内或细胞周围，经盐酸异丙醇溶解后为蓝色溶液，可用酶标测定仪测定细胞培养物的od值，测定波长为570nm。根据od值的大小计算反应体系中细胞增殖程度。

1.10％小牛血清（或FBS）RPMI1640、IL－2依赖的CTLL、3H－TdR、标准IL－2、MTT、酸性异丙醇、二甲亚砜（DMSO）、二甲苯。

2.“9999”型玻璃纤维滤纸、96孔平底培养板、细胞收集仪。3.CO2孵箱、ELISA测定仪、β液闪仪。

1.CTLL用10％FCSRPMI1640洗涤2次，每次用1000r／min离心5min，除去原培养液中的IL－2。调整CTLL细胞悬液为1×105／ml。

2.96孔平底培养板中每孔加CTLL悬液100μl（1×104／孔）。加入不同稀释度的标准IL－2和待测样品，100μl／孔，置37℃CO2孵箱，培养18～24h。

2.每孔加3H－TdR0.5μci／50μl，培养4～6h后，用多头细胞收集仪收获于“9999”型玻璃纤维滤纸上。干燥后，移入液闪瓶中，加入1ml闪烁液。用β液闪仪测定cpm值（每min脉冲数）。二、MTT（四甲基偶氮唑盐）法1.CTLL用10％FCSRPMI1640洗涤2次，每次用1000r／min离心5min，除去原培养液中的IL－2。调整CTLL细胞悬液为1×105／ml。2.96孔平底培养板中每孔加CTLL悬液100μl（1×104／孔）。加入不同稀释度标准IL－2和待测样品，100μl／孔，每份设3个重复孔。置37℃CO2孵箱，培养18～24h。

3.每孔加10μlMTT（5mg／ml溶于PBS），37℃CO2孵箱培养4h，轻轻吸出150μl上清，加入150μl二甲亚砜（DMSO）或酸性异丙醇（异丙醇溶于0.04mol／LHCl溶液中），溶解10min，测od值（570nm）。

1.3H－TdR掺入法：将标准的不同浓度IL－2和待测样品不同稀释度时所获得的cpm值作图，纵坐标采用概率坐标（probit），横坐标为log2稀释倍数（图10-1）。从50％的最高cpm值画一横线，取标准和待检斜线的交点，即可计算出待检样品IL－2的活性单位。如标准品50％最大cpm值时为1U／ml，待测标本1∶4时为1U／ml，则原液为4U／ml。

?2.MTT法：将标准IL－2不同浓度和待测样品不同稀释度时所获得的od值作图，计算出待检样品IL－2的活性单位。

【思考题】1.为什么说IL－2产生的水平反映了T淋巴细胞的状态？

好了，关于白细胞介素2和白细胞介素2的测定的问题到这里结束啦，希望可以解决您的问题哈！